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    *蝦白斑病毒(WSSV)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

    發(fā)布時間: 2012/7/4  點擊次數(shù): 1137次
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    蝦白斑病毒(WSSV)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

    試劑盒使用說明書
     

    蝦白斑病毒(WSSV)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

    本試劑盒僅供研究使用。
     

    蝦白斑病毒(WSSV)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒

    使用目的:
      本試劑盒用于測定蝦血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白斑病毒(WSSV)表達。
    實驗原理
    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中蝦白斑病毒(WSSV)表達。用純化的蝦白斑病毒(WSSV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中白斑病毒(WSSV)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的白斑病毒(WSSV)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中蝦白斑病毒(WSSV)的存在與否。
       試劑盒組成
    1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
    2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
    3 酶標包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
    5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
    6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
    標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)


    加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
    溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
    配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
    洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    溫育:操作同3。
    洗滌:操作同5。
    顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
    終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn))。
    測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。


    操作程序總結(jié):

     


    計算和結(jié)果判定:
       試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
       臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
       陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為蝦白斑病毒(WSSV)陰性
       陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為蝦白斑病毒(WSSV)陽性
     。
    注意事項
    1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
    2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
    封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物請避光保存。
    6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月
    NT2438-10g p-Nitrophenyl-azo-orcinol 鈹試劑Ⅰ [607-96-5] 10g
    N2609-25g 4-(p-Nitrophenyl-azo)-resorcinol 鎂試劑 I [74-39-5] 25g
    N6688-100mg 4-Nitrophenyl α-L-fuco­pyran­oside, 4-硝基苯-Α-L-吡喃海藻糖苷 [10231-84-2] 100mg
    N6672-100mg p-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside 對硝基苯基-beta-D-吡喃葡萄糖苷 [2492-87-7] 100mg
    N6694-500mg 4-Nitrophenyl β-D-glucuronide 4-硝基苯基-beta-D-葡萄糖醛酸苷 [10344-94-2] 500mg
    N6690-100mg α-p-Nitrophenylglycerol 1-(4-硝基苯基)甘油 [2207-68-3] 100mg
    N14K66-25g 4-Nitrophenylhydrazine 4-硝基苯肼 [100-16-3] 25g
    NB6689-10mg 2-Nitrophenyl-β-D-xylopyranoside 2-硝基苯基-beta-D-木糖苷 [10238-27-4] 10mg
    N5054-100g 5-Nitrosalicylic acid 5-硝基水楊酸 [96-97-9] 100g
     

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