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    ELISA試劑盒 人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA試劑盒

    發(fā)布時間: 2012/1/11  點擊次數(shù): 843次
    提 供 商: 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 資料大小:
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    人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA試劑盒
    本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷
    人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA檢測試劑盒使用說明書
    檢測原理
    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA試劑盒
    樣品收集、處理及保存方法
    1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
    2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
    3. 細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
    5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
    自備物品
    1. 酶標儀(450nm)人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA試劑盒
    2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
    3. 37℃恒溫箱
    操作注意事項
    1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
    2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
    3. 標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預(yù)處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。
    4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
    5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
    試劑盒組成
    名稱
    96孔配置
    48孔配置
    備注

    微孔酶標板
    12孔×8條
    12孔×4條


    標準品(800 ng/mL)
    0.6mL
    0.6mL
    按說明書進行稀釋

    標準品稀釋液
    6mL
    3mL


    樣本稀釋液
    6mL
    3mL


    檢測抗體-HRP
    10mL
    5mL


    20×洗滌緩沖液
    25mL
    15mL
    按說明書進行稀釋

    底物A
    6mL
    3mL


    底物B
    6mL
    3mL


    終止液
    6mL
    3mL


    封板膜
    2張
    2張


    說明書
    1份
    1份


    自封袋
    1個
    1個

     

    注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:800、400、200、100、50、25 ng/mL.
    試劑的準備
    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
    洗板方法
    1. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
    2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
    操作步驟
    1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
    2. 設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
    3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;
    4. 隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
    5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。
    6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
    結(jié)果判斷
    繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

    試劑盒性能
    1. 準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
    2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于10 ng/mL。
    3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
    4. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
    5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
    6. 有效期:6個月
    免責(zé)聲明
    1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負責(zé)。
    2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。
    人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1 ELISA試劑盒
     

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