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    大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

    發(fā)布時(shí)間: 2010/8/16  點(diǎn)擊次數(shù): 474次
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    相關(guān)產(chǎn)品:
    詳細(xì)介紹:

    大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
    試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
    本試劑盒僅供研究使用。
    藥品名稱(chēng):
    通用名:大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
    使用目的:
    本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶
    (PAMPK)含量。
    實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)水平。用
    純化的大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包
    被單抗的微孔中依次加入已知濃度的磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)標(biāo)準(zhǔn)品和未知
    濃度的 PAMPK 待檢樣品,溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗 IgG 抗體,再與鏈霉親和素-HRP
    結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化
    成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的磷酸化腺苷酸活化蛋白
    激酶(PAMPK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線
    計(jì)算樣品中大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(PAMPK)濃度。
    試劑盒組成
    1 20 倍濃縮洗滌液 50ml×1 瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S1(90 pmol/L) 0.5ml×1瓶
    2 鏈霉親和素-HRP 6ml×1 瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S2(60pmol/L) 0.5ml×1瓶
    3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 標(biāo)準(zhǔn)品S3(30pmol/L) 0.5ml×1瓶
    4 生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體 6ml×1 瓶 標(biāo)準(zhǔn)品S4(15pmol/L) 0.5ml×1瓶
    5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶
    9
    標(biāo)準(zhǔn)品S5(7.5pmol/L ) 0.5ml×1瓶  
    6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 10 密封袋 1 個(gè)
    7 終止液 6ml×1 瓶 11 封板膜 3 張
    8 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 12 說(shuō)明書(shū) 1 份
    標(biāo)本要求
    1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
    2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
    馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    操作步驟
    1. 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)
    孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
    2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體,鏈霉親和素-HRP,
    其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品 50μl,在
    樣本反應(yīng)孔中先加入待測(cè)樣品10μl再加入樣品稀釋液40μl(樣品zui終稀釋度為5 倍),
    蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
    3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用2
    4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
    重復(fù) 4次,拍干。
    5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體 50μl(空白孔除外)。
    37℃溫育30分鐘
    6. 洗滌:操作同 4。
    7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP(空白孔除外),輕輕振蕩混勻,
    37℃溫育30分鐘。
    8. 洗滌:操作同 4。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    15 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止
    液后 15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
    計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
    OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
    準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
    即為樣品的實(shí)際濃度。
    注意事項(xiàng)
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
    用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
    控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4.如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值),請(qǐng)先將樣本
    稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。顯色劑B請(qǐng)避光保存。
    7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
    9.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
    線形范圍:
    5pmol/L -100pmol/L
    規(guī)格:
    96 人份/盒
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個(gè)月

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