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    人血管內(nèi)皮生長因子VEGF說明書

    發(fā)布時間: 2010/8/14  點(diǎn)擊次數(shù): 431次
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    血管內(nèi)皮生長因子VEGF 

    本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:細(xì)胞培養(yǎng)上清液

     

    一、試 劑 組 成

    1、精密度微孔板Microtest Plates 96 wells            2、酶標(biāo)偶合液Enzyme Conjugate   12.0ml

    3、標(biāo)準(zhǔn)品Standard  5 x 1.0ml                     4、呈色劑ASubstrate  A  6.0ml

    5、呈色劑BSubstrate B  6.0ml                   6、終止液Stop Solution  6.0ml  

    7、濃縮洗滌液(120Rinsing Buffer 60.0ml        85倍樣品稀釋液  dilution 15.0m

     

    二、注意事項

    1.  此試劑為體外檢測試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號的試劑不能混用。

    2.  使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,

    3.  濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘。

    4.  濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘

    5.  24小時內(nèi)進(jìn)行實驗,標(biāo)本可存放于28℃。不需及時實驗,標(biāo)本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。

    6.  在沖洗微孔板過程中,務(wù)必反復(fù)清洗干凈,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低度,造成吸光度偏離的假像。

    7.  加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。

    8.  試劑盒保存于28℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標(biāo)示。

     

    三、實驗前準(zhǔn)備

    1使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。

    2.準(zhǔn)備各種實驗儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等

    3濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水119倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液

    4濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水14倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液

    5.用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)

     

     

    四、操 作 步 驟

    1.取出酶標(biāo)板,設(shè)空白孔,依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號標(biāo)準(zhǔn)品,用醫(yī)用蒸餾水替代

    2、分別標(biāo)記樣品編號,加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。

    3、將酶標(biāo)板置于37溫育30分鐘;

    4、將酶標(biāo)板板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體;

    5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

    6、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

    7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。

    8、將96孔板置于37溫育30分鐘。

    9、將酶標(biāo)板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體。

    10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

    11、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。

    12、在每個孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。A液、B液采用不同的吸頭加樣)

    13、將酶標(biāo)板置于37避光溫育反應(yīng)15分鐘。

    14、每個微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻

    15、在酶標(biāo)儀上,450nm處測定OD; 顯色后,15分鐘內(nèi)進(jìn)行測定。

    16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算樣本含量

     

    五、結(jié) 果 判 斷

    儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值。

    檢測值范圍:0 – 32ng/ml                    

        敏感度: 0.2 ng/ml

     

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