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    重點(diǎn)介紹ELISA試劑盒樣本處理及要求

    發(fā)布時(shí)間: 2013-08-16  點(diǎn)擊次數(shù): 892次

         ELISA試劑盒產(chǎn)品的優(yōu)劣主要是從其特異性,準(zhǔn)確性,度等幾個(gè)方面進(jìn)行判斷.由于篇幅關(guān)系,現(xiàn)對產(chǎn)品特異性進(jìn)行詳細(xì)講解:
    特異性指的是在PCR擴(kuò)增過程中,專一性地?cái)U(kuò)增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實(shí)驗(yàn)本身的靈敏度很高,且實(shí)驗(yàn)條件未充分優(yōu)化的情況,通常會(huì)在目的片段出現(xiàn)的同時(shí)伴隨有其他的雜帶,即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象。模板、引物性 質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會(huì)影響PCR擴(kuò)增的特異性。近年來的研究結(jié)果表明,緩沖液的品質(zhì)(如離子種類與組成,反應(yīng)優(yōu)化劑等)對保證PCR的特異性擴(kuò) 增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)S
    O4鹽離子體系的平衡調(diào)節(jié),顯著提高了PCR擴(kuò)增的特異性,降低背景。
    PCR實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實(shí)驗(yàn)體系調(diào)節(jié)實(shí)際就是找到適合實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性的平衡點(diǎn)。由于PCR體系中的眾多成分,使得組合較多,篩選工作繁雜。東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計(jì)了PCR Mix和HS Taq Mix,幫您確定大的平衡點(diǎn),如果您需要更細(xì)致的平衡點(diǎn),請選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進(jìn)行微調(diào)。
    ELISA試劑盒 操作實(shí)驗(yàn)中的樣本處理及要求:
    1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
    2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
    3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
    4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
    5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加進(jìn)一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加進(jìn)一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
    6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
    7. ELISA試劑盒不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

     

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