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    多聚螯合物酶法--EPOS法

    發(fā)布時間: 2011-11-22  點(diǎn)擊次數(shù): 2888次

    EPOS法(enhanced polymer one-step stainning)

    EPOS法(enhanced polymer one-step stainning)是Dako公司近年來推出的一步染色法,它不同于以往的酶標(biāo)記特異性抗體法,其原理(圖4—13)是采用一種具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)為骨架,將特異性抗體和HRP結(jié)合在一起,形成HRP—多聚化合物—特異性抗體巨大復(fù)合物,該復(fù)合物內(nèi)不含第二抗體及親和素。染色時,只需在組織切片上加入相應(yīng)的酶標(biāo)記特異性抗在組織切片上加入相應(yīng)的酶標(biāo)記特異性抗體EPOS試劑,孵育30~60min即可完成。勿需再加酶標(biāo)記第二抗體。

    EPOS法操作流程如下。
    (1)石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,PBS洗3minX3次。
    (2)蛋白酶消化或抗原修復(fù)(AR),PBS洗3minX3次。
    (3)0.3%過氧過氫(Hz02)處理5min。
    (4)蒸餾水洗,置于PBS中洗5min。
    (5)加入相應(yīng)的DakoEPOS/HRP試劑,室溫孵育30~60min
    (6)PBS洗3minX3次。
    (7)0.04%DAB-0.03%Hz02顯色8~12min。
    (8)水洗,復(fù)染,常規(guī)樹膠封片。
    EPOS法只需1次孵育,是目前zui簡便的方法。其特異性較高,基本無背景染色,敏感性雖然不如其他二步多聚螯合物方法,但符合一般工作需要。EPOS法不足之處是現(xiàn)有商品化的酶標(biāo)記特異性抗體的品種不全,目前只有20余種。此外,試劑價格昂貴,尚不能廣泛推廣應(yīng)用。
    EPOS法(enhanced polymer one-step stainning)
     

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