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    研域生物:酶標抗體的質量判定與保存

    發(fā)布時間: 2019-05-08  點擊次數(shù): 1830次

    1.  酶活性和抗體效價測定

    采用雙向免疫擴散法(稀釋抗體)和DAB-H2O2 顯色反響檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反響。
      

    2.  酶量和IgG量

    酶量(mg/ml)=OD403 ′0.4

    IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.42)′0.94′0.62

    其間,0.42為酶蛋白自身(0.3)及結合戊二醛后添加的OD值,0.94為抗體蛋白與醛化酶結合后,OD280 約添加6%,故乘以0.94。兔IgG的OD280 =1.0時為0.62.

    過碘酸鈉符號法IgG量(mg/ml)=(OD280- OD402 ′0.3)′0.94′0.62

    符號率= OD403 / OD280 =0.3-0.6,即一個抗體分子上結合1-2個HRP分子.符號率能夠大于0.6-0.9。OD403 / OD280 =0.4,約相當于E/P=1.0。
     

    酶標抗體的保存
    經(jīng)判定合格的酶標抗體,因為硫化物及疊氮化物等可與酶結合,使HRP失活,因而,不能用硫化物及疊氮化物作為防腐劑,可加入等量的60%甘油,小量分裝(0.5ml/支),置4℃~-30℃保存。

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