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    ELISA中常見問題及解決方法經(jīng)驗總結(jié)

    發(fā)布時間: 2017-09-08  點擊次數(shù): 2232次

    研域生物推出ELISA試劑盒代測:ELISA中常見問題及解決方法經(jīng)驗總結(jié)
    elisa實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的運用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對實驗的檢測作用影響較大,如不留意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等成果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),進步實驗質(zhì)量。
    下面分析Elisa實驗操作中可能影響成果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法
    1. 孵育
    可能原因: ①孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*; ②孵育時刻人為延伸,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反響孔周圍,難以清洗*。
    解決辦法:①貼封片或加蓋; ②按說明過程嚴厲控制操作時刻。
    2. 洗板
    可能原因:①選用手藝洗板,孔與孔之間液體穿插。②選用半自動洗板機洗板時,洗液量缺乏,導(dǎo)致洗板不*;洗板針阻塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板作用差。③反響板過多形成洗板等候時刻長。
    解決辦法: ①確保洗液注滿各孔,洗板針疏通,洗完板后在吸水紙(挑選潔凈、無或少塵的吸水資料)上輕輕拍干; ②合理安排,或多用幾臺洗板機。
    3. 顯色
    可能原因:①顯色劑制造后放置時刻過長或運用過期顯色劑; ②加顯色劑時濺起孔外形成液體回流。
    解決辦法:①顯色劑盡量在臨用前制造,堅持不期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不必;②加樣時保持顯色劑不外流; ③A、B液應(yīng)防止觸摸金屬器械。
    4. 挑選試劑
    挑選質(zhì)量的檢測試劑,嚴厲依照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
    5 加樣
    可能原因:①血清或血漿標本別離欠好即進行加樣;②手藝操作中,加樣板過多形成加樣后放入孵箱前等候時刻過長(特別是室內(nèi)溫度較高時);③加完標本再加酶試劑時酶濺起孔外。
    解決辦法:①標本為血清:將血液先天然寄存1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:有必要運用含抗凝劑的血液標本搜集管,采血后有必要當即倒置采血管混合5-10次,放置一段時刻后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要儲存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。② 加樣后及時放入孵箱。③加酶試劑后用吸水紙在酶標板外表輕拭吸干。④如果選用AT或其他全自動加樣,挑選FAME或其他后處理儀器加酶試劑。⑤標本較多時,請分批操作。
    6. 停止
    可能原因如加停止液時發(fā)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。所以在加停止液時應(yīng)防止發(fā)生氣泡。
    7. 讀板
    如讀板時板底不清潔等。應(yīng)確保酶標板清潔。
    所以在整個操作過程中確保酶標板不觸摸次氯酸;盡可能完成ELISA檢測規(guī)范自動化,有效進步檢測質(zhì)量。
    在實際操作中,除了挑選試劑外,有必要嚴厲依照操作過程進行操作,一起作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評,以謹慎的工作作風檢測每一份標本,才干確保檢測質(zhì)量。現(xiàn)在國內(nèi)已有適當數(shù)量的單位具有全自動酶標儀,這關(guān)于完成ELISA試劑盒規(guī)范化檢測、進步檢測質(zhì)量起到了重要作用。

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