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    人庚肝抗體(HGVAb)ELISA試劑盒說(shuō)明書

    發(fā)布時(shí)間: 2010-11-04  點(diǎn)擊次數(shù): 1775次

    人庚肝抗體(HGVAb)ELISA試劑盒僅供研究使用
    藥品名稱:
    通用名:人庚肝抗體(HGVAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
    使用目的:
    本試劑盒用于定性測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中庚肝抗體(HGVAb)。
    實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒采用間接法測(cè)定標(biāo)本中人庚肝抗體(HGVAb)。用純化的庚肝抗原包被微孔板,制成固相抗原,與樣品中庚肝抗體(HGVAb)溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中人庚肝抗體(HGVAb)的存在與否。,
    試劑盒組成

    1
     20倍濃縮洗滌液
     50ml×1瓶
     8
     樣品稀釋液
     6ml×1瓶
     
    2
     鏈霉親和素-HRP
     6ml×1瓶
     9
     陰性對(duì)照
     0.5ml×1瓶
     
    3
     酶標(biāo)包被板
     12孔×8條
     10
     陽(yáng)性對(duì)照
     0.5ml×1瓶
     
    4
     生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體
     6ml×1瓶
     11
     密封袋
     1個(gè)
     
    5
     顯色劑A液
     6ml×1瓶
     12
     封板膜
     3張
     
    6
     顯色劑B液
     6ml×1/瓶
     13
     說(shuō)明書
     1份
     
    7
     終止液
     6ml×1瓶
     
     
     
     


     
    標(biāo)本要求

    1.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

    2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

    操作步驟
    1.         編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔

    2.         加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育45分鐘。
    3.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
    4.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
    5.         加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘

    6.         洗滌:操作同4。

    7.         加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    8.         洗滌:操作同4。

    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

    11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

     
     
    結(jié)果判定:
      試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

      臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

      陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人庚肝抗體(HGVAb)陰性

      陽(yáng)性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人庚肝抗體(HGVAb)陽(yáng)性

     
    注意事項(xiàng)
    1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

    2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

    3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

    4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    5.底物請(qǐng)避光保存。

    6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm

    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。

    規(guī)格:
    96人份/盒

    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6個(gè)月

     

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