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    封閉液小知識:ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制

    發(fā)布時間: 2016-08-31  點擊次數(shù): 8335次

    我公司為您介紹ELISA實驗中的封閉液等常用試劑的配制。ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
    1、ELISA實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;
    2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
    3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。
    4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加,當然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
    封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
    封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會影響實驗的準確度。
    tween的作用:雖然不能單獨封閉,但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用,假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-
    附件:ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置
    ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?1) ELISA實驗包被緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(2) ELISA實驗洗滌緩沖液(3) ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。
    ELISA的試劑盒(1) ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
    NaHCO3 1.59克
    NaHCO3 2.93克
    加蒸餾水至1000ml
    (2) ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M
    KH2PO4 0.2克
    Na2HPO4·12H2O 2.9克
    NaCl 8.0克
    KCl 0.2克
    Tween-20 0.05% 0.5ml
    加蒸餾水至1000ml
    (3) ELISA實驗稀釋液:
    牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
    加洗滌緩沖液至100ml
    或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
    (4) ELISA實驗終止液(2M H2SO4):
    蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
    (5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
    0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml
    0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml
    加蒸餾水50ml。
    (6) ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
    TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml
    底物緩沖液(PH5.5) 10ml
    0.75%H2O2 32μl
    (7) ELISA實驗ABTS使用液:
    ABTS 0.5mg
    底物緩沖液(PH5.5) 1ml
    3%H2O2 2μl
    (8)ELISA實驗封閉液:
    牛血清白蛋白(BSA) 5克
    加洗滌緩沖液至100ml。
    我司溫馨提示您:有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。

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